Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC)

Embora a eletroforese de gel bidimensional (2-DE) seja um método comumente utilizado para analisar todo o proteome, ele tem limitações como capacidade de separação limitada, efeito discriminatório e procedimentos operacionais complicados. Muitas vezes é difícil obter resultados satisfatórios para a análise de grande alcance dinâmico, baixa abundância e proteínas hidrofóbicas. Chong et al. utilizaram espectrometria HPLC/massa para comparar e analisar a expressão diferencial de proteínas pré-malignas e cancerígenas. A proteína foi separada pelo HPLC, e as frações coletadas foram identificadas pelo MALDI-TOF-MS, de modo que a proteína foi analisada quantitativamente na expressão diferencial dos dois tipos de células. Como um novo tipo de tecnologia de separação, a cromatografia líquida multidimensional não tem a limitação da massa molecular relativa e ponto isoelétrico. Através da combinação de diferentes modos, elimina o efeito discriminatório da eletroforese de gel bidimensional. Possui as características de alta capacidade de pico e fácil automação. Cromatografia de fase de troca de íons bidimensionais (2D-IEC-RPLC) é o sistema de separação de cromatografia líquida multidimensional mais usado em pesquisa de proteômica.